Микроскопический анализ


Чтобы посмотреть презентацию с оформлением и слайдами, скачайте ее файл и откройте в PowerPoint на своем компьютере.
Текстовое содержимое слайдов:

Микроскопический анализ лекарственных растений и лекарственного растительного сырья подготовила преподаватель фармацевтических дисциплин Уварова И.В. Микроскопический анализ Микроскопический анализ основан на определении признаков анатомического строения и обычно применяется для исследования резаного и порошкообразного лекарственного сырья. Цель микроскопического анализа — установить подлинность сырья. Для этого рассматриваемый объект помещают на предметное стекло микроскопа в капле жидкости и накрывают покровным стеклом. Каждый препарат рассматривают сначала при малом увеличении для общей ориентировки, а для детального анализа — при большом увеличении. окулярный микрометр микротом Оборудование и материалы Для проведения микроскопического анализа требуется ряд оптических приборов и вспомогательных инструментов. Основные из них: микроскоп, лупа, поляроиды, объективный и окулярный микрометры окулярный микрометры. Для приготовления срезов сырья используют набор ботанических инструментов. Чаще всего это бритва и в особых случаях, если требуется по­лучить серию очень тонких срезов - микротом. Реактивы для микроскопического исследования можно разделить на две группы: 1) включающие (индифферентные) и просветляющие и 2) реактивы для микрохимических реакций. В качестве включающих и просветляющих жидкостей используют воду, глицерин, смесь глицерин-вода (1:2), 5 %-ный раствор хлоралгидрата, водный раствор щелочей, раствор перекиси водорода. Микропрепараты, приготовленные с помощью различной техники, помещают на предметное стекло с нанесенной включающей жидкостью и накрывают покровным стеклом. Микроскоп Микроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности глаза. Разрешающая способность микроскопа дает раздельное изображение двух близких друг другу линий. Разрешающая способность и увеличение не одно и тоже. Можно получить большое увеличение, но не улучшить его разрешение. Различают полезное и неполезное увеличения. Под полезным понимают такое увеличение наблюдаемого объекта, при котором можно выявить новые детали его строения. Неполезное - это увеличение, при котором, увеличивая объект в сотни и более раз, нельзя обнаружить новых деталей строения. Микроскоп: 1- основание микроскопа, 2- предметный столик, 3-винты для перемещения предметного столика, 4-клеммы, прижимающие препарат, 5- конденсор, 6- кронштейн конденсора, 7-винт, укрепляющий конденсор в гильзе, 8- рукоятка перемещения конденсора, 9- рукоятка ирисовой диафрагмы конденсора, 10- зеркало, 11- тубусодержатель, 12-микрометрический винт, 13- микрометрический винт, 14- револьвер, 15-объективы, 16-наклонный тубус, 17- винт для крепления тубуса, 18- окуляр Устройство микроскопа В микроскопе выделяют две системы: оптическую и механическую. К оптической системе относят объективы, окуляры и осветительную систему. Объектив - состоит из нескольких линз. Увеличение обозначено на нем цифрами. Окуляр состоит из 2-3 линз. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15. Для определения общего увеличения микроскопа следует умножить увеличение объектива на увеличение окуляра. Осветительное устройство состоит из зеркала или электроосветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Механическая система микроскопа состоит из подставки, коробки с микрометренным механизмом и микрометренным винтом, тубусодержателя, винта грубой наводки, кронштейна конденсора, винта перемещения конденсора, револьвера, предметного столика. Правила работы с микроскопом Для работы с микроскопом необходим хороший источник света. Микроскоп берут за среднюю часть тубу-содержателя и ставят на стол, протирают мягкой салфеткой окуляр и объектив, ставят объектив на малое увеличение и при помощи зеркала направляют свет так, чтобы он попал через отверстие столика в тубус микроскопа. Не глядя в окуляр, при помощи макровинта к предметному стеклу приближают объектив приблизительно на 0,5 см, затем смотрят в окуляр, поднимают тубус микроскопа до появления изображения препарата и, слегка вращая микровинт вправо и влево, устанавливают тубус так, чтобы получилось отчетливое изображение. Если надо рассмотреть, материал при большом увеличении, то, не глядя в окуляр, медленно поднимают тубус микроскопа макровинтом. Легко поворачивая микровинт получают отчетливое изображение препарата. Во время работы надо не допускать попадания жидкости на линзу объектива. Нельзя прикасаться пальцами к поверхности линз, так как при этом остаются жирные следы, мешающие четкому изображению. После окончания работы поднимают тубус высоко вверх и только после этого снимают препарат со столика. Все части микроскопа следует протереть сухой мягкой салфеткой. Хранят микроскоп в специальном ящике или под полкэтиленовым футляром. Подготовка образца для микроскопического анализа. Анализ измельченного сырья начинают с внешнего осмотра, который проводят на сухом материале визуально или с помощью лупы х10, желательно при дневном освещении. Отмечают цвет, опушенность, наличие каких-либо дополнительных признаков, проверяют запах при растирании кусочков сырья между пальцами, определяют морфологическую группу ЛРС.Сухое растительное сырье перед работой следует размягчить. С учетом особенностей объекта применяют холодное размачивание, кипячение, размягчение в водных парах во влажной камере, горячий способ размягчения: размягчение в воде, размягчение в растворе щелочи, размягчение в растворе хлоралгидрата, разрушение тканей. Приготовление временных микропрепаратов После соответствующей подготовки сырья из него готовят микропрепараты. Техника их приготовления разнообразна и зависит от состояния сырья и его принадлежности к определенной морфологической группе (лист, кора, подземные органы).Приготовление препаратов с поверхности. Для приготовления микропрепарата листа с поверхности мелкие листья используют целиком, от крупных берут отдельные участки с учетом распределения важнейших диагностических элементов: край листа, зубчик по краю листа, участок главной жилки, верхушку листа и основание. Если лист надо рассматривать с двух сторон, кусочек листовой пластинки режут на две части скальпелем на предметном стекле; одну часть осторожно переворачивают и помещают обе части рядом. При анализе резаных листьев выбирают несколько кусочков с крупной жилкой и краем листа.Препараты цветков для микроскопического анализа готовят из отдельных частей соцветия (цветки, листочки обвертки) и частей цветка (лепестки, чашелистики), рассматривая их с поверхности. Для идентификации плодов и семян готовят поперечные срезы. Для микродиагностики коры и подземных органов из предварительно размягченного сырья готовят поперечные, реже продольные срезы. Приготовление срезов Для изучения тканей и органов, обладающих твердой структурой, готовят срезы. Для приготовления среза крупные объекты можно просто держать в руке. Мелкие объекты или тонкие зажимают в сердцевину бузины, корковую пробку или заливают в парафин.Сердцевина бузины используется для нежных объектов (листья, цветки, чашелистики и др.), пробка — для более твердых объектов (тонкие корни, кора, плоды и др.). Пробки выбирают мягкие, их предварительно вываривают в воде до размягчения. Перед изготовлением срезов кусочки сердцевины бузины или размягченную пробку разрезают вдоль на две части. Объект зажимают между двумя половинками и делают срезы, направляя лезвие бритвы вдоль щели. Объект срезают вместе с бузиной или пробкой, кусочки которых потом отделяют иглой от срезов и выбрасывают. Очень мелкие плоды, семена или другие объекты при необходимости заплавляют в парафин. Из парафина готовят кубик, удобный для удерживания пальцами, затем в одну из поверхностей кубика вкладывают кончик нагретой препаровальной иглы, в расплавленное углубление быстро погружают объект и ожидают, когда парафин застынет. Срезают верхнюю часть объекта и отбрасывают, делая затем поперечные или продольные срезы из средней части семени или плода. Их освобождают от парафина и заключают в соответствующую жидкость. Препараты растительных порошков Для приготовления препаратов всех морфологических групп на предметное стекло помещают 1—2 капли включающей жидкости, смачивают в ней конец препаровальной иглы или скальпеля и берут исследуемый порошок; переносят его на предметное стекло в жидкость; осторожно, чтобы не попал воздух, накрывают покровным стеклом. Если при этом жидкости под стеклом оказалось мало, добавляют ее из пипетки рядом с покровным стеклом (она быстро затягивается под стекло). Если жидкости окажется много, её удаляют, не снимая стекла полоской фильтровальной бумаги. Необходимо соблюдать правило: на предметное стекло вначале следует вносить включающую жидкость, а затем порошок, чтобы не загрязнить реактивы. Препараты готовят в растворе хлоралгидрата или в, растворе КОН, медленно нагревают до полного просветления и выявляют все диагностические признаки. При необходимости проводят микрохимические реакции. Клетки эпидермы и устьица. Б, В—клетки эпидермы с извилистыми стенками (Л — устьица окружены двумя клетками, Б — устьица окружены четырьмя клетками, В—складчатость кутикулы); Г, Д — клетки эпидермы с прямыми стенками (Д— четковидные утолщения клеток эпидермы) Диагностические признаки лекарственного сырья под микроскопом Эпидерма. Клетки эпидермы бывают с прямыми или извилистыми боковыми стенками, иногда с четковидными утолщениями. Имеет значение и характер кутикулы (пленка, покрывающая эпидерму, состоящая из кутина). На эпидерме листа есть устьица; их форма, расположение (с одной или с двух сторон листа), характер окружения их клетками эпидермы постоянны и характерны для видов некоторых семейств. У некоторых растений , есть водяные устьица, находящиеся на верхушке и зубчиках листа. Волоски Их форма очень разнообразна. Встречаются волоски простые и головчатые. Простые волоски бывают одно- или многоклеточными, ветвистыми, извилистыми, звездчатыми, многолучевыми, пучковыми, Т-образными, жгучими (у крапивы). Поверхность волоска может быть гладкой или бородавчатой, что зависит от характера кутикулы, покрывающей волосок. Головчатые, волоски отличаются размером, строением ножки и головки. У некоторых растений в головке волоска, под кутикулой, скапливается эфирное масло. Головка может быть шаровидной, овальной, одно-, двух-, многоклеточной, ножка — одноклеточной и многоклеточной. Железки и эндогенные вместилища эфирных масел, смолистых веществ, млечники, секреторные ходы Строение железок, вместилищ с эфирным маслом характерно для каждого вида растений, а иногда и для семейства. Вместилища бывают схизогенные (образующиеся путем расхождения клеток) и схизолизигенные (вначале клетки расходятся, а затем растворяются). Млечники и секреторные каналы отличаются составом содержимого и обычно сопровождают проводящие пучки, жилки. Кристаллы В растениях часто встречаются кристаллы оксалата кальция. Форма кристаллов, разнообразна друзы, рафиды, «кристаллический песок», одиночные кристаллы; иногда они образуют сростки и кристаллоносную обкладку. В листьях некоторых растений имеются клетки, содержащие карбонат кальция (например, цистолиты в листьях крапивы двудомной). Диагностические признаки морфологических группСемена На поперечных срезах обращают внимание на общее строение семени, кожуры, запасной питательной ткани — эндосперма и зародыша. В кожуре важное значение имеет механический слой, состоящий из радиально вытянутых или изодиаметрических клеток. Эндосперм и зародыш состоят из однородных клеток; значение имеет также содержимое клеток — жирное масло, крахмал, алейроновые зерна. При измельчении семян лучше сохраняются волоски и слои кожуры, особенно механический и пигментный. Препарат цветков ромашки аптечной и безъязычной: А-трубчатый цветок ромашки безъязычной; Б-трубчатый цветок ромашки аптечной; В-язычковый цветок ромашки аптечной; Г-фрагмент цветка. 1-эфирномасличные железки. Цветки В качестве лекарственного сырья цветки используют в цельном виде. При их анализе могут играть роль эфирномасличные железки, кристаллы, сосочковидные выросты на эпидерме, волоски и пыльца характерной формы и размеров, иногда механические элементы. Микроскопия листа алтея лекарственного: 1— слабоизвилистые клетки верхней эпидермы, имеющие иногда четковидные утолщения; 2 — клетки ниж­ней эпидермы с прямыми или извилистыми стенками; 3— устьица на обеих сторонах листа с 3—4 около- устьичными клетками (аномоцитный тип); 4 — друзы кальция оксалата в мезофилле листа и вдоль жилок; 5 — простые одноклеточные волоски; 6 — звездчатые волоски из 4—8 толстостенных клеток; 7 — основания волосков с одревесневшими оболочками; 8 — железистые волоски с одно-, двухклеточной ножкой и голов­кой, состоящей из 4—8 выделительных клеток, расположенных в несколько ярусов, по 2—4 клетки в каждом; 9 — клетки-идиобласты со слизью Травы Основное внимание обращают на признаки листьев, так как травы определяют по листьям. Иногда имеют значение элементы стеблей, цветков, плодов. На стеблях наиболее характерны эпидерма с многоугольными вытянутыми клетками, обрывки крупных прямых сосудов (в отличие от разветвляющихся жилок листа), механические волокна. Элементы порошка плода шиповника: 1-эпидермис; 2-ткань мякоти с друзами оксалата кальция; 3-ткань мякоти с каротином и друзами оксалата кальция; 4-каменистые клетки орешка; 5-волоски; 6-элементы проводящих пучков. Плоды У плодов рассматривают строение околоплодника. Диагностические признаки сочных и сухих плодов резко отличаются. В порошках диагностическое значение имеют механические элементы кожуры семени и околоплодника,  иногда: волоски, канальцы. Клетки питательной ткани заполнены жирным маслом и алейроновыми зернами, реже крахмальными зернами; их присутствие легко обнаружить микрохимическими реакциями. Препарат коры калины поперечный срез: 1-пробка; 2-колленхима; 3-первичная кора; 4-вторичная кора; 5-; 6-лубяные волокна; 7-каменистые клетки.друзы оксалата кальция Кора Диагностические признаки этого сырья — расположение и характер механических элементов: лубяных волокон и каменистых клеток, колленхимы. Механические элементы располагаются одиночно или группами, рассеянно или поясами, иногда лубяные волокна окружены кристаллоносной обкладкой. Обращают внимание на строение пробки. В коре некоторых растений имеются млечники или вместилища с эфирным маслом, включения оксалата кальция. Некоторые виды коры подвергают микросублимации. Проводят качественные химические реакции Микроскопия корня алтея лекарственного: а — фрагмент перидермы и коры; б — фрагменты центрального цилиндра; 1 —тонкостенная паренхима с крах­мальными зернами; 2 — тангентально вытянутые группы лубяных волокон со слабоутолщенными, целлю­лозными или слабоодревесневшими стенками, расположенные прерывистыми концентрическими поясами; 3 — мелкие группы волокон в древесине; 4 —сосуды; 5 — трахеиды; 6 — сердцевинные лучи одно-, реже двух­рядные; 7 — клетки со слизью в паренхиме коры и древесины (в воде слизь растворяется, клетки становятся бесцветными и кажутся пустыми); 8 — друзы кальция оксалата Корни, корневища, клубни На поперечном срезе обращают внимание на тип их строения у двудольных растений: пучковый или непучковый (пучки открытые или закрытые, коллатеральные или биколлатеральные). При непучковом типе отмечают характер древесины, расположение в ней сосудов, ширину сердцевинных лучей, характер вторичного утолщения сосудов и трахеид (спиральные, лестничные, сетчатые пористые, с простыми или окаймленными порами); на механические элементы — волокна, каменистые клетки и др.

Приложенные файлы


Добавить комментарий