Методические рекомендации к практическому занятию «Аминокислоты. Белки»

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
СРЕДНЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
«КРАСНОЯРСКИЙ МЕДИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ КОЛЛЕДЖ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ


Специальность 060604 Лабораторная диагностика Квалификация Медицинский технолог
Медицинский лабораторный техник


МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №

Тема: «АМИНОКИСЛОТЫ. БЕЛКИ.

Утверждены на заседании ЦМК
№ протокола .
«___»____________ 2014 г.


Составитель: Ростовцева Л.В.





Красноярск
2014
Методические рекомендации для преподавателя
Тема занятия «Аминокислоты. Белки.

Значение темы:
Аминокислоты являются основными элементами, из которых строятся молекулы белка. Животные организмы получают их при гидролизе белков, а также при непосредственном введении в организм в случае возникновения различных заболеваний.
Аминокислоты играют важную роль не только в построении белковых молекул, но и в азотистом обмене – образовании аммиака, мочевины и многочисленных азотсодержащих соединений, при этом выделяется энергия, необходимая организму для процессов жизнедеятельности.
Некоторые синтетические волокна также построены из аминокислот, например, капрон, построен из остатков
·-аминокапроновой кислоты.
Белки являются основой всего живого на Земле и выполняют в организмах многообразные функции: пластическую, транспортную, защитную, энергетическую, каталитическую, регуляторную. Белки – необходимая составная часть пищи человек, отсутствие или недостаток их может вызвать серьезные заболевания.
В клинической лабораторной практике используют реакции осаждения белков для выделения альбуминовой и глобулиновой фракций белков плазмы крови, количественной характеристики их устойчивости в плазме, обнаружения белков в биологических жидкостях и освобождения от них с целью получения без белкового раствора.

Цели обучения:
Общая цель:
Студент должен овладеть общими компетенциями:
OK 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных состояниях.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

Студент должен овладеть профессиональными компетенциями
ПК 3.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных
биохимических исследований.
ПК 3.2. Проводить лабораторные биохимические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества.
Учебная цель:
Изучить состав, строение, классификацию, номенклатуру, изомерию аминокислот. Двойственность кислотно-основных свойств аминокислот. Химические свойства
· - аминокислот. Пептидную группу атомов и пептидную связь. Первичную, вторичную, третичную и четвертичную структуры белков. Химические свойства белков: денатурацию, гидролиз, качественные (цветные реакции).

Сформировать умения:
составлять структурные формулы аминокислот,
писать уравнения реакции их поликонденсации.
проводить реакции, характеризующие химические свойства аминокислот и белков,
составлять соответствующие уравнения реакций.

Метод обучения: репродуктивно-побуждающий.
Тип занятия: формирование знаний и умений.
Место проведения практического занятия: учебная комната.
Оснащение занятия: пробирки, держатели, спиртовка, штативы

НА 1 РАБОЧЕЕ МЕСТО
Реактивы:
р-р белка,
р-р NaOH (насыщ),
HNО3(конц),
р-р CuSО4,
Рb(СН3СОО)2

Схема хронокарты практического занятия
№ п/п
Этапы
практического занятия
Продолжи-тельность (мин)
Содержание этапа и оснащенность


Организационный
2
Проверка посещаемости и внешнего вида обучающихся.


Формулировка темы и цели
3
Преподавателем объявляется тема и ее актуальность, цели занятия.


Контроль исходного уровня знаний.
20
Устный опрос.


Методические указания для самостоятельной работы студентов.
15
Раскрыть этапы выполнения лабораторной работы.
Инструктаж по ТБ.


Самостоятельная работа обучающихся (текущий контроль).

120
Выполнение упражнений по строению, номенклатуре, изомерии, химическим свойствам аминокислот.
Выполнить лабораторную работу по методическим указаниям. Отчет о лабораторной работе оформить в тетради, записать соответствующие уравнения реакций.


Итоговый контроль знаний.
15
Тестирование


Подведение итогов
3
Подводится итог занятия. Выставляются отметки.

7
Задание на дом
2
Пустовалова, Л. М.Химия : учебник / Л. М. Пустовалова, И. Е. Никанорова. - М. : КНОРУС, 2014.
Самостоятельная внеаудиторная работа. Выполнение упражнений. Решение ситуационных задач.

Всего:
180



Контроль исходного уровня:
Ответьте на вопросы:
Что такое аминокислоты?
Что такое заменимые и незаменимые аминокислоты? Приведите примеры.
Как будут действовать на индикатор (лакмус) растворы аланина, лизина, аспарагиновой кислоты?
Что такое белки, каково их строение?
В чём отличие протеинов от протеидов?
Какие структурные уровни организации характерны для белковых молекул и чем они характеризуются?
Опишите химические свойства белков.
Охарактеризуйте функции белков в организме.

Итоговый контроль знаний (Приложение 1).

Литература:
Пустовалова, Л. М.Химия : учебник / Л. М. Пустовалова, И. Е. Никанорова. - М. : КНОРУС, 2014.









HYPER13 PAGE \* MERGEFORMAT HYPER144HYPER15


ФГОС СПО - 03
11

HYPER13PAGE \* MERGEFORMATHYPER143HYPER15




љђ Заголовок 1 Заголовок 2љђ Заголовок 3 Заголовок 4 Заголовок 6Уђ Заголовок 8 Заголовок 9HYPER15Основной шрифт абзаца


Методические рекомендации для студентов
Тема «Аминокислоты. Белки.
Значение темы:
Аминокислоты являются основными элементами, из которых строятся молекулы белка. Животные организмы получают их при гидролизе белков, а также при непосредственном введении в организм в случае возникновения различных заболеваний.
Аминокислоты играют важную роль не только в построении белковых молекул, но и в азотистом обмене – образовании аммиака, мочевины и многочисленных азотсодержащих соединений, при этом выделяется энергия, необходимая организму для процессов жизнедеятельности.
Некоторые синтетические волокна также построены из аминокислот, например, капрон, построен из остатков ε-аминокапроновой кислоты.
Белки являются основой всего живого на Земле и выполняют в организмах многообразные функции: пластическую, транспортную, защитную, энергетическую, каталитическую, регуляторную. Белки – необходимая составная часть пищи человек, отсутствие или недостаток их может вызвать серьезные заболевания.
В клинической лабораторной практике используют реакции осаждения белков для выделения альбуминовой и глобулиновой фракций белков плазмы крови, количественной характеристики их устойчивости в плазме, обнаружения белков в биологических жидкостях и освобождения от них с целью получения без белкового раствора.
На основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен
знать:
состав, строение, классификация, номенклатура, физические и химические свойства аминокислот;
состав, структура и свойства белков; качественные (цветные) реакции белков;
биологические функции белков;
уметь:
составлять структурные формулы аминокислот, писать уравнения реакции их поликонденсации;
проводить реакции, характеризующие химические свойства аминокислот и белков, составлять соответствующие уравнения реакций.
овладеть ОК и ПК
OK 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных состояниях.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
ПК 3.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных
биохимических исследований.
ПК 3.2. Проводить лабораторные биохимические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества
План изучения темы:
1.Контроль исходного уровня знаний.
Ответьте на вопросы:
Что такое аминокислоты?
Что такое заменимые и незаменимые аминокислоты? Приведите примеры.
Как будут действовать на индикатор (лакмус) растворы аланина, лизина, аспарагиновой кислоты?
Что такое белки, каково их строение?
В чём отличие протеинов от протеидов?
Какие структурные уровни организации характерны для белковых молекул и чем они характеризуются?
Опишите химические свойства белков.
Охарактеризуйте функции белков в организме.
2. Содержание темы
Аминокислоты – гетерофункциональные соединения, содержащие две функциональные группы: аминогруппу ―NH2 и карбоксильную группу ―COOH, связанные с углеводородным радикалом.
Общая формула аминокислот:
(H2N)m―R― (COOH)n,
где m и n – чаще всего равны 1 или 2
По систематической номенклатуре аминокислоты называют по соответствующей карбоновой кислоте с добавлением приставки амино-. Положение аминогруппы указывают соответствующей цифрой.
Например,
3 2 1
СН3─СН─СООН 2-аминопропановая кислота

NH2
3 2 1
NH2─СН2─СН2─СООН 3-аминопропановая кислота
По рациональной номенклатуре положение аминогруппы ―NH2 указывается буквами греческого алфавита, начиная со второго атома углерода: α, β, γ, δ, ε и т.д. Название кислоты используется тривиальное.
β α
СН3─СН─СООН α -аминопропионовая кислота

NH2
βα
NH2─СН2 ─СН─СООН β –аминопропионовая кислота
Для аминокислот характерны виды изомерии;
1. углеродного скелета
2. положения аминогруппы
3*.у многих аминокислот возможна оптическая изомерия
Химические свойства аминокислот
Аминокислоты могут взаимодействовать друг с другом с образование пептидов:

Любой дипептид имеет свободные амино- и карбоксильную группу и поэтому может взаимодействовать с ещё одной молекулой аминокислоты, образуя трипептид и т.д. Реакция образования пептидов относится к реакциям поликонденсации.
Общая формула пептидов:

Белки – высокомолекулярные органические соединения, состоящие из α-аминокислот, соединенных пептидными связями.
По химическому составу белки делят на две основные группы.
К первой группе – протеины – относятся те белки, при гидролизе которых образуются только аминокислоты.
Вторую группу – протеиды – составляют белки, при гидролизе которых помимо аминокислот образуются и другие соединения, например, липиды, углеводы, фосфорные кислоты и др.
В состав белков входит свыше 20 различных аминокислот. Все белки сильно различаются между собой по качественному и количественному составу различных аминокислот, по взаиморасположению аминокислотных остатков.
В тканях и органах человека и животных могут синтезироваться 12 α-аминокислот (заменимые аминокислоты), 8 α-аминокислот в организме человека и животных не синтезируются (незаменимые аминокислоты) и должны поступать в организм с пищей.

Таблица 1.
Формулы и названия некоторых аминокислот
остатки, которых входят в состав белков
Формула
аминокислоты Название Формула
аминокислоты Название
Глицин
(аминоуксусная кислота) Аспарагиновая кислота
(α‒ аминоянтарная кислота)
Аланин
(α- аминопропионовая кислота) Глутаминовая кислота
(α‒ аминоглутаровая кислота)
Серин
(α –амино – β - окси пропионовая кислота) Лизин
(α, ε ‒ диаминокапроновая кислота)
Цистеин
(α –амино – β - меркаптопропионовая кислота) Тирозин
(α –амино – β - параоксифенилпропионовая кислота)
Валин
(α –аминоизовалериановая кислота)
Фенилаланин
(α –амино – β - фенилпропионовая кислота)

Строение белковых молекул
Различают четыре уровня структурной организации белковых молекул.
Таблица 2.
Характеристика структур белковых молекул
Структура белковой молекулы Графическое изображение Характеристика структуры
Первичная структура белка Число и последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи. Поддерживается пептидными связями.
Вторичная структура белка Для большинства белков — это α-спираль, которая образуется в результате скручивания полипептидной цепи за счет водородных связей между группами: —СО— и —NН— .
Существуют белки, имеющие другие типы вторичной структуры.
Третичная структура белка Пространственная конфигурация спирали. У большинства белков полипептидные цепи свернуты особым образом в «клубок» — компактную «глобулу». Эта структура поддерживается за счет гидрофобных взаимодействий, а также водородных, дисульфидных, ионных и других связей. Существуют белки, у которых третичная структура почти или совсем не выражена
Четвертичная структура белка Способ совместной укладки нескольких полипептидных цепей; образующиеся структуры называются ассоциатами.

Химические свойства белков
1. Гидролиз белков:
H+
[− NH2─CH─ CO─NH─CH─CO − ]n +2nH2O → n NH2 − CH − COOH +
│ │ ‌‌│
R1 R2 R1 аминокислота 1

n NH2 ─ CH ─ COOH

R2 аминокислота 2
2. Осаждение белков:
а) обратимое. Белок в растворе ↔ осадок белка. Происходит под действием растворов солей Na+, K+.
б) необратимое (денатурация). Под действием внешних факторов (температура; механическое воздействие – давление, растирание, встряхивание, ультразвук; действия химических агентов – кислот, щелочей и др.) происходит изменение вторичной, третичной и четвертичной структур белковой макромолекулы, т.е. её нативной пространственной структуры. Первичная структура, а, следовательно, и химический состав белка не меняются.

3. Горение белков
Белки горят с образованием азота, углекислого газа, воды, а также некоторых других веществ. Горение сопровождается характерным запахом жженых перьев.
4. Цветные (качественные) реакции на белки:
а) ксантопротеиновая реакция (на остатки аминокислот, содержащих бензольные кольца):
Белок + HNO3 (конц.) → желтое окрашивание
б) биуретовая реакция (на пептидные связи):
Белок + CuSO4 (насыщ) + NaOH (конц) → ярко-фиолетовое окрашивание
в) цистеиновая реакция (на остатки аминокислот, содержащих серу):
Белок + NaOH + Pb(CH3COO)2 → Черное окрашивание
Белки являются основой всего живого на Земле и выполняют в организмах многообразные функции (таблица 3).
Таблица 3.
Функции белков в организме
Функция Пояснение и примеры
Строительная
Белки участвуют в образовании клеточных и внеклеточных структур: входят в состав клеточных мембран, волос (кератин), сухожилий (коллаген) и т.д.
Транспортная
Переносят различные вещества. Белок крови гемоглобин присоединяет кислород О2 и транспортирует его от легких ко всем тканям и органам, а от них переносит углекислый газ СО2.
Защитная
Обезвреживают чужеродные вещества. В ответ на проникновение в организм чужеродных белков или микроорганизмов образуются особые белки – антитела, способные связывать и обезвреживать их. Например, γ - глобулин сыворотки крови.
Энергетическая При расщеплении 1 г белка освобождается 17,6 кДж энергии.
Каталитическая
Ускоряют протекание химических реакций в организме
Все ферменты по своей химической природе являются белками. Например, фермент пепсин.
Сократительная
Выполняют все виды движений, к которым способны клетки и организмы. Сократительные белки актин и миозин (белок мышц) обеспечивают сокращение мышц.
Регуляторная
Гормоны белковой природы принимают участие в регуляции процессов обмена веществ. Например, гормон инсулин регулирует уровень глюкозы в крови, способствует синтезу гликогена.

Существуют белки, выполняющие специфические функции, например рецепторные, — обеспечивают передачу импульсов между нервными клетками и др.

Генетические связи между веществами следует понимать как генетическое родство веществ на основании их строения и свойств, показывающее единство и взаимосвязь всех органических соединений.
В практическом плане генетические связи показывают, из каких веществ и какими способами можно получить нужные вещества. Каждый переход – это одновременно и выражение химических свойств вещества и возможных путей его практического использования.
Схема 1.

3. Самостоятельная работа
1. Как будут действовать на индикатор (лакмус) растворы аланина, лизина, аспарагиновой кислоты? Ответ поясните.
2. Напишите уравнения реакций, доказывающих амфотерность аланина.
3. Приведите в общем виде уравнение реакции образования соединений с пептидной связью.
4. Как с помощью одного и того же реактива распознать растворы трех веществ: белка, глюкозы, глицерина?
5. Напишите уравнения реакций, с помощью которых можно осуществит следующие превращения: этан → этилен → этиловый спирт → уксусный альдегид → уксусная кислота → хлоруксусная кислота → аминокислота → полипептид
6. Напишите уравнения реакций, с помощью которых можно осуществить превращения:

При написании уравнений реакций напишите структурные формулы веществ, назовите вещества Х1, Х2, Х3.
4. Лабораторная работа
«Исследование свойств белков: денатурация, качественные (цветные) реакции белков»
Цель: экспериментально изучить свойства белков, качественные (цветные) реакции белков.
№ Название опыта и реактивы Ход опыта
1. Биуретовая реакция
Реактивы: раствор белок, NaOH, CuSO4. В пробирку поместите 2-3мл раствора белка, добавьте раствор NaOH, а затем немного раствора сульфата меди (II) CuSO4.
Что наблюдаете? Наличие, каких связей в молекуле белка доказывает эта реакция?
2. Ксантопротеиновая реакция
Реактивы: белок, конц. азотная кислота HNO3. В пробирку поместите 2-3мл раствора белка, добавьте 0,5-1мл конц. азотной кислоты HNO3. Осторожно! Что наблюдаете?
Остатки, каких аминокислот доказывают этой реакцией?
3. Цистеиновая реакция
Реактивы: белок, Pb(CH3COO)2, NaOH. В пробирку поместите 2-3мл раствора белка прилейте ацетат свинца (II), затем гидроксид натрия и нагрейте. Что наблюдаете? Наличие, каких аминокислот доказывают этой реакцией?
4. Взаимодействие со спиртом.
Реактивы: белок, этиловый спирт В пробирку с 2-3мл белка прилейте немного спирта. Что наблюдаете? Как называется процесс, происходящий с белком.
5. Действие температуры на раствор белка.
Реактивы: раствор белок
Нагрейте пробирку с белком на пламени спиртовки. Что наблюдаете? Назовите еще причины, способные вызвать денатурацию белка.
Отчет по лабораторной работе оформите по схеме:
1. Название лабораторной работы
2. Цель работы
3. Название опыта, уравнения реакций, наблюдения и выводы.
5. Итоговый контроль знаний.
Тестирование
6. Подведение итогов.
7. Домашнее задание
Пустовалова, Л. М.Химия : учебник / Л. М. Пустовалова, И. Е. Никанорова. - М. : КНОРУС, 2014.
Самостоятельная внеаудиторная работа. Выполнение упражнений. Решение ситуационных задач.


Аминокислоты. Белки
Вариант 1.
Часть А
Выберите один правильный вариант ответа
1. В состав аминокислот входят функциональные группы:
а) только ─OH и ─NH2б) только ─COH и ─NH2
в) ─COOH и ─NH2 и другие
г) ─COOH и ─NO2 и другие
2. Формула аминоуксусной кислоты
а) NH2─CH2─COOH
б) CH3─CH2─COOH
в) CH3─CH2─NO2
г) CH3─CH─COOH

NH2
3. Моноаминомонокарбоновые кислоты обладают
а) основными свойствами
б) кислотными свойствами
в) амфотерными свойствами
4. Первичная структура белка осуществляется за счет связей
а) водородных
б) ионных
в) пептидных
г) дисульфидных
5. Вторичная структура белка –
а) последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи
б) пространственная конфигурация, которую принимает полипептидная цепь
в) конфигурация, которую принимает в пространстве закрученная в спираль полипептидная цепь
г) ассоциаты, образованные из нескольких полипептидных цепей
6. В формировании какой структуры белка участвуют дисульфидные связи
а) первичнойб) вторичной
в) третичной
г) четвертичной
7. Полипептиды получаются в результате реакции
а) этерификации
б) полимеризации
в) поликонденсации
г) дегидрирования
8. Для обнаружения в составе белков остатков ароматических кислот используют
а) биуретовую реакцию
б) ксантопротеиновую реакцию
в) реакцию гидролиза
г) реакцию этерификацию
9. Реактивы, необходимые для проведения биуретовой реакции
а) HNO3 (конц.)
б) (CH3COO)2Pb, NaOH
в) CuSO4, NaOH
г) H2SO4, t0
10. Признак ксантопротеиновой реакции:
а) ярко-синий раствор
б) голубой осадок
в) черное окрашивание
г) желтое окрашивание
Часть В
11. При гидролизе белка образуются _____________
12. Какие явления происходят с белком при добавлении щелочи или кислоты? Как называется этот процесс?
Часть С
13. Составьте структурные формулы изомеров для аминокислоты состава С3Н7NН2. Назовите вещества по систематической номенклатуре.
14. Напишите уравнение реакции получения дипептида, образованного двумя молекулами ε-аминокапроновой кислоты. Выделите пептидную группу атомов.
Аминокислоты. Белки
Вариант 2.
Часть А
Выберите один правильный вариант ответа
1. Аминокислотой является
а) CH3─CH2─NH2
б) CH3─CH2─NO2
в) NH2─CH2─COOH
г) C6H5NO2
2. Диаминомонокарбоновые кислоты обладают:
а) основными свойствами
б) кислотными свойствами
в) амфотерными свойствами
3. Формула 2-аминопропановой кислоты:
а) NO2─CH2─COOH
б) CH3─CH─COOH

NH2
в) NH2─CH2─COOH
г) CH2─CH2─COOH
4. Под первичной структурой белка понимается
а) последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи
б) пространственная конфигурация полипептидной цепи
в) соединение белковых макромолекул
г) объем, форма и взаимное расположение участков цепи
5. Связь, удерживающая вторичную структуру белка, является
а) пептидной
б) солевым мостиком
в) дисульфидным мостиком
г) водородной
6. В формировании какой структуры белка участвуют сложноэфирные связи
а) первичнойб) вторичной
в) третичной
г) четвертичной
7. Образование пептидной связи осуществляется за счет групп
а) ─CОН и ─NH2
б) ─ОН и ─NH2
в) ─СООН и ─NH2
г) ─СООН и ─NО2
8. Для обнаружения в составе белков остатков серосодержащих аминокислот используют
а) биуретовую реакцию
б) ксантопротеиновую реакцию
в) цистеиновую реакцию
г) реакцию этерификацию
9. Реактивы, необходимые для проведения ксантопротеиновой реакции:
а) HNO3 (конц.)
б) (CH3COO)2Pb, NaOH
в) CuSO4, NaOH
г) H2SO4, t0
10. Признак биуретовой реакции:
а) ярко-синий раствор
б) голубой осадок
в) черное окрашивание
г) желтое окрашивание
Часть В
11. При добавлении к раствору белка солей натрия происходит процесс ____________
12. Какие вещества образуются в результате гидролиза белков в организме?
Часть С
13. Составьте структурные формулы аминомасляной кислоты и её изомеров. Назовите вещества по систематической номенклатуре.
14. Какие вещества вступили в реакцию, если образовались следующие продукты реакции:
… + … → NH2─CH─CO─NH─CH2─COOH + H2O

СН3
Как называется этот тип реакции?
Эталоны ответов на тестовые задания
Аминокислоты. Белки
Часть А Часть В Часть С
Вариант I
мах – 24 балла 1. в
2. а
3. в
4. в
5. б
6. в
7. в
8. б
9. в
10. г
мах – 10 баллов 11. α-аминокислоты
12. разрушение вторичной и третичной структуры – денатурация
мах – 4 балла 13. – 5 баллов
14. – 5 баллов
NH2─(CH2)5─COOH + NH2─(CH2)5─COOH → NH2─(CH2)5[─CO─NH─](CH2)5─COOH
мах –10 баллов
Вариант II
мах – 24 балла 1. в
2. а
3. б
4. а
5. г
6. в
7. в
8. в
9. а
10. а
мах – 10 баллов 11.высаливание
12. α-аминокислоты
мах – 4 балла 13. – 5 баллов
14. – 5 баллов
СH3─CH(NH2)─COOH
2-аминопропановая кислота (аланин)
NH2─CH2─COOH
аминоуксусная кислота (глицин)
реакция - поликонденсации
мах – 10 баллов
24 – 20 баллов – «5»
19 – 17 баллов - «4»
16 – 13 баллов – «3»
12 баллов и менее – «2»

Приложенные файлы

  • doc file1
    Размер файла: 76 kB Загрузок: 5
  • docx file2
    Размер файла: 923 kB Загрузок: 4
  • docx file3
    Размер файла: 27 kB Загрузок: 4